問(wèn)題一：菲羅門(mén)色譜柱是否可以反沖，那什么情況可以反沖，什么不可以?反沖后是正著用，還是反著用?
這是一個(gè)困擾很多液相使用者的問(wèn)題。
很多人說(shuō)，如果色譜柱柱頭堵了，壓力升高了，反沖完了效果很好！
也有很多人，包括廠(chǎng)商的工程師說(shuō)不建議反沖，沖了會(huì)影響柱效。
多種說(shuō)法眾說(shuō)紛紜，讓這個(gè)問(wèn)題幾乎成了一個(gè)業(yè)界之謎。
那么，今天我們就來(lái)分析討論一下，色譜柱到底能不能反沖，以及背后的原因是什么？
我們都知道，大多數(shù)液相色譜柱里面充滿(mǎn)了直徑幾個(gè)微米的硅膠小球，這些硅膠小球在高壓條件下被填入了色譜柱以后，色譜柱的兩端需要用篩板封起來(lái)，這樣既能夠讓流動(dòng)相順利通過(guò)，又保硅膠小球老老實(shí)實(shí)呆在色譜柱里面，不會(huì)跟著流動(dòng)相跑出來(lái)。
當(dāng)然篩板的孔徑要夠小，不然就封不住硅膠小球。
但是入口篩板孔徑如果做得特小，也會(huì)產(chǎn)生一個(gè)問(wèn)題，那就是很容易被樣品堵塞。樣品稍微有一點(diǎn)沒(méi)處理好，或者沒(méi)有溶解好，篩板就被堵了，柱壓就升高了，至柱子就廢掉了。
所以，很多廠(chǎng)商就決定把色譜柱入口的篩板孔徑做得比出口篩板的孔徑大一些，這樣既能保硅膠小球不會(huì)被沖出色譜柱，也能讓柱頭不那么容易堵塞。
但是，這種情況下，色譜柱往往就不能反沖了。
因?yàn)槿绻礇_，在把堵塞在入口篩板上的污染物沖出來(lái)的同時(shí)，柱頭的填料可能也會(huì)被沖出來(lái)，造成柱效的降，至色譜柱的報(bào)廢。
說(shuō)到這里，我們總結(jié)一下：
·如果色譜柱出入口篩板孔徑一樣的話(huà)，那就可以反沖，正反使用都無(wú)所謂，即使是色譜柱上面標(biāo)注了方向（還需注意色譜柱的填料基質(zhì)）。
·但是如果色譜柱出入口篩板孔徑不一樣的話(huà)（一般是入口孔徑大于出口孔徑），反沖就有可能造成填料漏出，柱效降等等。

問(wèn)題二:如果菲羅門(mén)柱子取下來(lái)放置一段時(shí)間，需要做什么保護(hù)嗎?
對(duì)一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發(fā)，應(yīng)該不需要做殊的保護(hù)。

問(wèn)題三:多個(gè)樣品不好不離的時(shí)候，請(qǐng)問(wèn)該怎么通過(guò)選擇合適的菲羅門(mén)柱子來(lái)提分離度?
提分離度可從三個(gè)主要影響因素來(lái)考慮，柱效、選擇性和保留因子。

可通過(guò)減小填料粒徑和增加柱長(zhǎng)提柱效;選擇性和固定相選擇以及pH 條件有關(guān)，通過(guò)選擇合適的色譜柱和合適的pH，可以提選擇性;有時(shí)候適當(dāng)延出峰時(shí)間增加保留因子，也可提分離度。

問(wèn)題四:因?yàn)椴恢懒鲃?dòng)相已走完，液相色譜柱空走了大概一晚上，請(qǐng)問(wèn)這種情況下柱子還能用嗎?如果可以應(yīng)該如何再生?
還能用的。可能柱子里會(huì)有氣泡進(jìn)去，但之后多用流動(dòng)相沖沖，看到基線(xiàn)穩(wěn)定，就沒(méi)問(wèn)題了。用色譜柱的保存液低流速長(zhǎng)時(shí)間沖洗，然后再檢測(cè)一下柱效，看柱子是否恢復(fù)，液相建議設(shè)置一下壓限，這樣就不怕流動(dòng)相光而會(huì)色譜柱。