目前最全氨基酸HPLC分析方法總結(jié)
氨基酸作為構(gòu)成多肽和蛋白的基本單元，是非常重要的一類化合物。
隨著生物藥的逐漸興起，作為原料的氨基酸的質(zhì)量分析的需求也越來(lái)越大。
大部分氨基酸由于至少同時(shí)含有大極性的氨基和羧基，因此整體極性很大，常用的C18柱+反相流動(dòng)相對(duì)其保留很弱，同時(shí)部分氨基酸由于紫外吸收很弱，因此讓流動(dòng)相和檢測(cè)器的選擇更有挑戰(zhàn)。
本文系統(tǒng)總結(jié)廣州菲羅門(mén)積累經(jīng)典色譜應(yīng)用，包括氨基酸衍生化分析、非衍生氨基酸直接分析、保護(hù)型氨基酸的手性分析以及非保護(hù)型氨基酸直接手性分析四種廣受關(guān)注的應(yīng)用。
一、氨基酸衍生化分析
氨基酸衍生的方法比較多，最常用的是AQC衍生和PITC衍生。
雖然過(guò)程相對(duì)繁瑣，但是通過(guò)衍生后，一舉解決了氨基酸分析的兩個(gè)難點(diǎn)：
保留和紫外吸收。
通過(guò)衍生反應(yīng)在氨基酸上接上疏水且有紫外吸收的基團(tuán)，可以實(shí)現(xiàn)在C18柱+反相流動(dòng)相的體系下進(jìn)行HPLC分析。
AQC衍生法：
PITC衍生法：
二、非衍生氨基酸直接分析
當(dāng)選擇氨基酸非衍生直接分析時(shí)，對(duì)于有些疏水性比較好的氨基酸，可以直接用C18類柱子分析，比如：
可以選用帶有HILIC作用的色譜柱實(shí)現(xiàn)保留，當(dāng)使用磷酸鹽類時(shí)，可以在截止波長(zhǎng)條件下用UV檢測(cè)，比較經(jīng)典的應(yīng)用是用ACE HILIC-B檢測(cè)門(mén)鳥(niǎo)氨酸：
菲羅門(mén)也推出Comix系列智能神柱，可以在以ELSD、 CAD或者MS為檢測(cè)器的條件下分析氨基酸。
三、保護(hù)型氨基酸手性分析
當(dāng)氨基酸上的氨基和羧基用Boc和/或FMOC等保護(hù)起來(lái)時(shí)，可以用正相或者反相的多糖類手性柱實(shí)現(xiàn)非常好的分離，有現(xiàn)成的分析方法，可以極大地減少方法開(kāi)發(fā)的時(shí)間。
四、非保護(hù)氨基酸直接手性分析
對(duì)于非保護(hù)的氨基酸，菲羅門(mén)推出AAOA分析柱，即通過(guò)鍵合D-青霉胺于十八烷基柱上而成的配體交換型手性柱。該手性柱手性柱可以用于拆分α-型有機(jī)酸、α-型非衍生氨基酸及其衍生物、二元胺、二肽、內(nèi)酰胺和氨基醇等。
到目前為止，我們已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了有機(jī)酸如D, L-乳酸、D, L-酒石酸的拆分，也實(shí)現(xiàn)了氨基酸如D, L-丙氨酸，D, L-天門(mén)冬氨酸，D, L-纈氨酸，D, L-脯氨酸：
總結(jié)
對(duì)于具體氨基酸的分析如有疑問(wèn)，可以電話020-22826668找到您專屬的技術(shù)工程師。
